Council Directive
of 26 June 1990
on animal health conditions governing the movement and import from third countries of equidae
(90/426/EEC) (repealed)
F1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F1CHAPTER 1General provisions
F1Article 1
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F1Article 2
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F1CHAPTER IIRules for the movement of equidae
F1Article 3
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F1Article 4
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F1Article 5
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F1Article 6
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F1Article 7
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F1Article 8
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F1Article 9
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F1Article 10
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F1CHAPTER IIIRules for imports from third countries
F1Article 11
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F1Article 12
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F1Article 13
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F1Article 14
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F1Article 15
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F1Article 16
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F1Article 17
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F1Article 18
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F1Article 19
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F1Article 20
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F1Article 21
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F1CHAPTER IVFinal provisions
F1Article 22
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F1Article 23
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F1Article 24
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F1Article 25
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F1Article 26
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F1Article 27
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F1Article 28
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F1ANNEX ACOMPULSORILY NOTIFIABLE DISEASES
F1ANNEX B
F1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F1ANNEX C
F1ANNEX DAFRICAN HORSE SICKNESS
DIAGNOSIS
F1. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F11.COMPETITIVE ELISA FOR THE DETECTION OF ANTIBODIES TO AFRICAN HORSE SICKNESS VIRUS (AHSV) (PRESCRIBED TEST)
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. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F11.1.Test procedure
F11.1.1.Preparation of plates
F11.1.1.1.
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F11.1.1.2.
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F11.1.2.Control wells
F11.1.2.1.
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F11.1.2.2.
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F11.1.2.3.
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F11.1.2.4.
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F11.1.3.Spot test method
F11.1.3.1.
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F11.1.4.Serum titration method
F11.1.4.1.
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. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F11.1.5.Add 50 μl of guinea pig antisera, pre-diluted in blocking buffer, to all wells except the blank wells of the ELISA plate (all wells now contain a final volume of 100 μl).
F11.1.5.1.
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F11.1.5.2.
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F11.1.5.3.
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F11.1.5.4.
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F11.1.5.5.
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F11.1.6.Chromogen
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F11.1.7.Reading
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F11.2.Expression of results
F11.2.1.Using a software package print out the optical density (OD) values, and the percentage inhibition (PI) for test and control sera based on the mean value recorded in the four guinea pig control wells. The data expressed as OD and PI values are used to determine whether the test has performed within acceptable limits. The upper control limits (UCL) and lower control limits (LCL) for the guinea pig control are between OD values 1,4 and 0,4 respectively. The end-point titre for the positive control based on 50 % PI should be 1 in 240 (within a range from 1 in 120 to 1 in 480). Any plate that fails to conform to the above criteria must be rejected. However, if the positive control serum titre is greater than 1 in 480 and the test samples are still negative then the negative test samples can be accepted.
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F11.2.2.The diagnostic threshold (cut-off value) for test sera is 50 % (PI 50 %). Samples recording PI values greater than 50 % are recorded as positive. Samples recording PI values lower than 50 % are recorded as negative.
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F12.INDIRECT ELISA FOR THE DETECTION OF ANTIBODIES TO AFRICAN HORSE SICKNESS VIRUS (AHSV) (PRESCRIBED TEST)
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. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F12.1.Test procedure
F12.1.1.Solid phase
F12.1.1.1.
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F12.1.1.2.
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F12.1.1.3.
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F12.1.1.4.
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F12.1.2.Test samples
F12.1.2.1.Serum samples to be tested, and positive and negative control sera, are diluted 1 in 25 in PBS + 5 % (w/v) skimmed milk + 0,05 % (v/v) Tween 20, 100 μl per well. Incubate for 1 hour at 37 °C.
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F12.1.2.2.
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F12.1.3.Conjugate
F12.1.3.1.
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F12.1.3.2.
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F12.1.4.Cromogen/Substrate
F12.1.4.1.Add 200 μl/well of chromogen/substrate solution (10 ml of 80,6 mM DMAB (dimethyl aminobenzaldehyde) + 10 ml of 1,56 mM MBTH (3-methyl-2-benzo-thiazoline hydrazone hydrochlorid) + 5 μl H2O2)
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F12.1.4.2.
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F12.2.Interpretation of the results
F12.2.1.
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F12.2.2.
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F12.2.3.
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F12.2.4.
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F13.BLOCKING ELISA FOR THE DETECTION OF ANTIBODIES TO AFRICAN HORSE SICKNESS VIRUS (AHSV) (PRESCRIBED TEST)
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F13.1.Test procedure
F13.1.1.ELISA plates
F13.1.1.1.
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F13.1.1.2.
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F13.1.1.3.
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F13.1.2.Test samples and controls
F13.1.2.1.
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F13.1.2.2.
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F13.1.3.Conjugate
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F13.1.4.
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F13.1.5.Chromogen/Substrate
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F13.1.6.Reading
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F13.2.Interpretation of the results
F13.2.1.Assay validation
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F13.2.2.Cut-off calculation
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
F13.2.3.Interpretation of results
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
Repealed by Council Directive 2009/156/EC of 30 November 2009 on animal health conditions governing the movement and importation from third countries of equidae (codified version) (Text with EEA relevance).